Question

【題目】嗜熱土壤芽胞桿菌產生的β一葡萄糖苷酶（BglB）是一種耐熱纖維素酶。為使其在工業(yè)生產中更好地應用，開展了以下試驗。如圖為質粒限制酶酶切圖譜，如表為幾種限制酶的識別序列及酶切位點。請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	NdeⅠ
識別序列 及切割位點	G↓GATCC	A↓AGCTT	G↓AATTC	CA↓TATG

（1）通常情況下，獲得的目的基因需要進行擴增，最簡便的方法是_____技術。

（2）分析圖，可選擇_____和_____兩種不同的限制酶切割質粒，以防止質粒自身環(huán)化。質粒被切割后，可用_____將其與目的基因連接。在動物基因工程中將目的基因導入受體細胞時通常的方法是_____。

（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉入上述建構好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為_____。

（4）蛋白質工程是二代基因工程，它的基本途徑是：從預期的蛋白質功能出發(fā)→_____→_____→找到相對應的脫氧核昔酸序列。

Answer 1

【答案】PCR NdeⅠ BamHⅠ DNA連接酶 顯微注射法 轉基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶 設計預期的蛋白質結構 推測應有的氨基酸序列

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）擴增目的基因最簡單的方法是PCR技術。

（2）用限制酶切割質粒時，選擇的限制酶不可以破壞質粒上的標記基因、復制原點、啟動子、終止子等必須的結構，且切割后目的基因插入的位點必須在啟動子與終止子之間，所以分析質粒結構，可以選擇的限制酶為NdeⅠ和BamHⅠ；質粒被切割后，可用DNA連接酶將其與目的基因連接。在動物基因工程中，將目的基因導入受體細胞時通常的方法是顯微注射法。

（3）大腸桿菌不能降解纖維素，但轉入上述建構好的表達載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因為轉基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶。

（4）蛋白質工程的基本途徑是從預期的蛋白質功能出發(fā)→設計預期的蛋白質結構→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核昔酸序列。