Question

【題目】白細(xì)胞介素是人體重要的淋巴因子，具有免疫調(diào)節(jié)、抑制腫瘤等多種功能。近年來科學(xué)家將藥用蛋白轉(zhuǎn)向植物生產(chǎn)，如圖是將人的白細(xì)胞介素基因?qū)�入馬鈴薯中，培養(yǎng)生產(chǎn)白細(xì)胞介素的過程。（tsr為一種抗生素—硫鏈絲菌素的抗性基因）

（1）提取人的白細(xì)胞介素基因適宜選用的限制酶是___________，不能使用限制酶SmaI的原因是___________。

（2）除圖示方法外，也可從利用___________法構(gòu)建的cDNA文庫中獲取目的基因。獲得目的基因后可采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增，需提供Taq酶和___________等。

（3）將目的基因?qū)�入馬鈴薯細(xì)胞常采用___________法，其原理是將目的基因?qū)��?/span>Ti質(zhì)粒上的___________。

（4）為篩選出含目的基因的馬鈴薯細(xì)胞，需要在培養(yǎng)基中添加___________。最終為了檢測目的基因是否在馬鈴薯中表達(dá)，可通過____________方法進(jìn)行分子水平的檢測。

Answer 1

【答案】PstⅠ和HindⅢ 限制酶SmaⅠ酶切位點(diǎn)位于白細(xì)胞介素基因中部，使用它會造成目的基因斷裂 反轉(zhuǎn)錄 引物 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 T-DNA 硫鏈絲菌素 抗原—抗體雜交

【解析】

分析題圖，圖示表示人的白細(xì)胞介素基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，載體和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位點(diǎn)，所以切割載體和目的基因時用限制酶PstⅠ和HindⅢ，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組載體。獲取目的基因的方法包括從基因文庫中獲取、cDNA文庫法、供體細(xì)胞的DNA中直接分離基因（鳥槍法）。農(nóng)桿菌通過侵染植物傷口進(jìn)入細(xì)胞后，可將Ti質(zhì)粒的T-DNA插入到植物基因組中。

（1）載體和目的基因都有限制酶PstⅠ和HindⅢ的切割位點(diǎn)，使用限制酶SmaI則會破壞目的基因；

（2）目的基因的獲取可以采用cDNA文庫法（即逆轉(zhuǎn)錄法），指以某生物成熟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成的cDNA序列的重組DNA群體，采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增，需提供Taq酶和引物等；

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，利用的是Ti質(zhì)粒上的T-DNA；

（4）構(gòu)建好的表達(dá)載體含有硫鏈絲菌素的抗性基因，因此可以在培養(yǎng)基中添加硫鏈絲菌素進(jìn)行篩選，為檢測目的基因是否順利表達(dá)，可以通過抗原-抗體雜交技術(shù)。