Question

【題目】B淋巴細胞瘤是一種惡性腫瘤，用常規(guī)手段治療時，會損傷大量的正常組織細胞，因此探索高效的治療手段已成為腫瘤治療領(lǐng)域需要迫切解決的熱點問題。

（1）B淋巴細胞瘤產(chǎn)生的根本原因____________。體內(nèi)一旦出現(xiàn)腫瘤細胞，正常機體通過細胞免疫，發(fā)揮了免疫系統(tǒng)的____________功能，從而避免人體患病。但由于各種原因，導(dǎo)致腫瘤細胞表面抗原表達量____________,無法被免疫系統(tǒng)識別，從而成功躲避攻擊，得以快速增殖。

（2）實驗證實，CD19是B淋巴細胞瘤中特異性表達的一種抗原，在少數(shù)正常細胞，如B細胞、漿細胞中也有少量表達；CD28、CD137可激活T細胞，使其恢復(fù)增殖和抗腫瘤能力�？蒲腥藛T利用了在_________技術(shù)發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)獲得的CD19單克隆抗體，進而與CD28、CD137組成嵌合抗原受體（CAR),其結(jié)構(gòu)如下圖所示。請預(yù)測CAR在免疫應(yīng)答中的優(yōu)勢：_________________。

（3）利用__________酶將控制CD19單抗、CD28、CD137等合成的相關(guān)基因構(gòu)建成嵌合基因，然后將嵌合基因與作為___________的修飾過的病毒結(jié)合，導(dǎo)入到T細胞并整合到__________上，檢測到目的（嵌合）基因表達后，培養(yǎng)獲得了大量的含嵌合抗原受體的T細胞（CAR—T）。

（4）對CAR—T的抗腫瘤效果進行檢測。

實驗步驟	具體操作
第一步	取40只生理狀態(tài)基本相同的裸鼠（無胸腺），通過外科手術(shù)將體積相同的惡性B淋巴瘤組織埋在裸鼠的直腸處，并將上述裸鼠隨機均分為A、B、C、D四組。
第二步	A組：注射lmL磷酸鹽緩沖液（PBS)； B組：注射 ； C組：注射lmL含有T細胞（僅轉(zhuǎn)入空載體）的PBS； D組(實驗組）：注射 。
第三步	每5天測量腫瘤體枳，共觀測30天，對觀察結(jié)果進行ki錄。

①選取裸鼠的原因是_______________________。

②B組注射___________________，D組注射_____________________。

③通過對實驗結(jié)果的觀測，證實了CAR-T細胞對小鼠體內(nèi)的腫瘤生長有明顯抑制作用，那么試推測相應(yīng)的實驗結(jié)果是怎樣的？_______________________________。

（5）你認為將CAR-T用于人類腫瘤治療，可能存在的風(fēng)險是______________________。

Answer 1

【答案】 原癌基因與抑癌基因突變 監(jiān)控和清除 減少 動物細胞融合 既可識別并結(jié)合腫瘤抗原又能激活T細胞，使其具有増殖和抗腫瘤能力 DNA連接 運載體 細胞核中的DNA(染色體DNA) 裸鼠無胸腺，缺少T細胞，避免排異反應(yīng)對實驗干擾；避免自身T細胞殺傷腫瘤細胞 1mL含有正常T細胞的PBS 1mL含有CAR-T的PBS D組腫瘤體積明顯小于A、B、C組（或腫瘤體積D<C≈B<A) CAR-T對某些正常組織（B細胞或漿細胞）表達的抗原進行免疫應(yīng)答、載體插入到正�；�因組中引起變異

【解析】試題分析：從圖中可見，A區(qū)含CD19單抗，可特異性結(jié)合B淋巴細胞瘤表面的抗原CD19，B區(qū)含CD28、CD137，可激活T細胞，所以該嵌合體抗原受體CAR的優(yōu)勢是既能通過結(jié)合CD19特異性識別B淋巴細胞瘤，又能激活T細胞產(chǎn)生效應(yīng)T細胞，增強了效應(yīng)T細胞定向殺傷B淋巴細胞瘤的能力。

（1）細胞癌變是原癌基因和抑癌基因發(fā)生突變導(dǎo)致的，體內(nèi)一旦出現(xiàn)腫瘤細胞，正常機體通過細胞免疫，發(fā)揮了免疫系統(tǒng)監(jiān)控和清除的功能，從而避免人體患病。效應(yīng)T細胞無法識別腫瘤細胞，說明腫瘤細胞膜表面抗原減少，無法被免疫系統(tǒng)識別，從而成功躲避攻擊，得以快速增殖。
（2）在制備單克隆抗體時，通常需要使用動物細胞培養(yǎng)和動物細胞融合技術(shù)。從圖中可見，A區(qū)含CD19單抗，可特異性結(jié)合B淋巴細胞瘤表面的抗原CD19，B區(qū)含CD28、CD137，可激活T細胞，所以該嵌合體抗原受體CAR的優(yōu)勢是既能通過結(jié)合CD19特異性識別B淋巴細胞瘤，又能激活T細胞產(chǎn)生效應(yīng)T細胞，增強了效應(yīng)T細胞定向殺傷B淋巴細胞瘤的能力。
（3）構(gòu)建嵌合基因需要將CD19單抗基因和CD28基因、CD137基因整合在一起，所以需要限制酶切割，又需要DNA連接酶連接。目的基因?qū)�入到受體細胞時需要運載體，此處選擇的運載體是動物病毒。由于目的基因?qū)�入后需要能在受體細胞穩(wěn)定存在并表達，所以需要讓目的基因整合到細胞本身的染色體DNA上。
（4）①由于要檢測CAR-T（嵌合抗原受體T細胞）的效果，最好沒有其他T細胞的干擾，而裸鼠體內(nèi)無胸腺，不能產(chǎn)生T細胞，能避免排異反應(yīng)對實驗干擾，所以選取裸鼠的原因就是為了排除鼠自身T細胞對實驗結(jié)果的影響。
②由于要檢測CAR-T的效果，D組（實驗組）中就應(yīng)注射等量含CAR-T的PBS。實驗中C組的T細胞中轉(zhuǎn)入了空載體，D組T細胞中轉(zhuǎn)入了連有嵌合基因的載體，那么在邏輯上要確認實驗結(jié)果是由嵌合基因表達產(chǎn)物造成的，還需要排除導(dǎo)入載體的過程對實驗結(jié)果的影響，所以B組就應(yīng)該注射等量的未轉(zhuǎn)入載體的正常T細胞的PBS。
③要得到“CAR-T對小鼠體內(nèi)的腫瘤生長有明顯抑制作用”的結(jié)論，那么預(yù)期的實驗結(jié)果就是D組裸鼠的腫瘤體積最小。
（5）由于CD19抗原在少數(shù)正常細胞，如B細胞、漿細胞中也有少量表達，所以在使用CAR-T治療時，也有可能殺傷正常B細胞、漿細胞，導(dǎo)致體液免疫能力減弱；也可能載體插入到正�；�因組中引起變異。