Question

【題目】苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株。篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請回答下列問題：

（1）②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入_______作為碳源，②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基_____（A.影響；B.不影響）細菌的數(shù)量，如果要測定②中活細菌數(shù)量，常采用_____________法。

（2）④為對照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_____________；使用_____________法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時平板倒置原因是_____________。

（3）若要比較不同菌株降解苯酚能力，簡要的思路是__________________________。

（4）實驗過程中如何防止其它微生物的污染？_____________。（至少達答兩點）

Answer 1

【答案】 苯酚 A 平板菌落計數(shù)(活菌計數(shù)或菌落計數(shù)) ④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基加入苯酚作為碳源 平板分離(稀釋涂布平板或平板劃線分離) 避免培養(yǎng)過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長 用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，測定培養(yǎng)液中苯酚含量 培養(yǎng)基滅菌，接種環(huán)境滅菌，接種過程無菌操作等

【解析】【試題分析】

本題綜合考查微生物的培養(yǎng)及實驗設(shè)計和分析能力。從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。題目中所篩選的細菌“只能”降解苯酚，故可采用以苯酚為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基篩選，含除苯酚外其他碳源的培養(yǎng)基作為對照。嚴格滅菌、無菌操作可有效防止實驗過程中的雜菌污染。

（1）②中的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源，以增大降解苯酚細菌的濃度；②中不同濃度的碳源影響（A）細菌數(shù)量，可用平板菌落計數(shù)法來測定②中活菌數(shù)目。

（2）④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養(yǎng)基中加入苯酚作為碳源；使用釋涂布平板法或平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落；采用固體平板培養(yǎng)細菌時要倒置培養(yǎng)，以避免培養(yǎng)過程產(chǎn)生的水分影響微生物的生長。

（3）用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株，一定時間后，測定培養(yǎng)液中苯酚含量，可比較不同菌株降解苯酚的能力。

（4）實驗過程中要防止其它微生物的污染，應(yīng)該做到從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實驗過程都無菌操作，如培養(yǎng)基滅菌、接種環(huán)境滅菌、接種過程無菌操作等。